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原代心肌細胞研究要注意些什么？

作為主要的研究模型，原代心肌細胞被廣泛應用于心血管研究。那么我們在研究過程中都要注意些什么呢？1、新生鼠年齡的選擇新生鼠心肌細胞在出生后3天內(nèi)具有部分增殖能力，而成年鼠心肌細胞為終末分化細胞，不再具有分裂增殖能力。因此，大鼠出生時間越短，離體心肌細胞存活率越高，越容易貼壁。大量觀察表明，選擇1～3日齡大鼠分離心肌細胞進行原代培養(yǎng)是理想的，尤其是半日齡大鼠。2、消化酶的選擇和使用新生大鼠原代心肌細胞間可采用組織塊法和消化法分離。前者較少使用，因為難以獲得密度均勻的細胞和控制成纖...

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一文帶你全面了解細胞因子

一文帶你全面了解細胞因子一、細胞因子的概念細胞因子（cytokine，CK），是由免疫細胞（如單核、巨噬細胞、T細胞、B細胞、NK細胞等）和某些非免疫細胞（內(nèi)皮細胞、表皮細胞、纖維母細胞等）經(jīng)刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學活性的小分子蛋白質（多肽或糖蛋白）。細胞因子的發(fā)現(xiàn)歷史1957年，發(fā)現(xiàn)干擾素（interferon，IFN）1969年，提出淋巴因子（lymphokine）的概念1974年，定名細胞因子（cytokine，CK）1975年，命名了腫瘤壞死因子（Tumo...

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RNA pull down實驗技術

RNApulldown實驗技術1.實驗原理RNApulldown是體外研究RNA與蛋白互作的重要技術。該技術是用生物素標記體外轉錄的靶RNA分子，再用鏈霉親和素純化出與靶RNA結合的蛋白復合體，洗脫得到RNA結合蛋白質。再通過westernblot實驗檢測特定的RNA結合蛋白是否與靶RNA結合；或通過質譜儀檢測可以篩選出與靶RNA結合的蛋白。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用；其中活化生物素可以在蛋白質交聯(lián)劑的介導下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯(lián)。因此...

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DNA pull down實驗技術

DNApulldown實驗技術1.實驗原理DNApulldown是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術將生物素標記的DNA片段結合在鏈霉親和素磁珠上，再與細胞核蛋白孵育，純化出與DNA片段互作的蛋白，洗滌洗脫得到的蛋白產(chǎn)物，做Westernblot檢測特定蛋白是否與靶DNA片段結合；做質譜鑒定即可篩選出與DNA片段可能互作的蛋白信息(如：轉錄因子、組蛋白等)。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強度最高的非共價作用；其中活化生物素可以在蛋白質交聯(lián)劑的介導下，與已知的幾乎...

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GST pull down實驗技術

GSTPulldown實驗技術1.實驗原理Pulldown技術是將"誘餌"蛋白與一種易于純化的配體標簽（如：GST標簽、His標簽）進行融合表達，而帶標簽的誘餌蛋白能被特異結合該標簽的固相親和配基捕獲，形成"次級親和支持物"，用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產(chǎn)物洗脫后，經(jīng)Westernblot驗證或LC-MS/MS，即鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-轉移酶（GST）融合標簽從細菌中一步純化出GST融合蛋白。從此，GST融合蛋白在蛋白...

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常用的細胞凋亡檢測方法【大盤點】

細胞凋亡人體內(nèi)的細胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡則是病理性的，有關細胞死亡過程的研究，已成為生物學、醫(yī)學研究的一個熱點。已知的細胞死亡方式起碼有兩種，即細胞壞死與細胞凋亡(apoptosis)。細胞壞死是早已被認識到的一種細胞死亡方式，而細胞凋亡則是逐漸被認識的一種細胞死亡方式。此圖片來源于網(wǎng)絡細胞凋亡是細胞的一種基本生物學現(xiàn)象，在多細胞生物去除不需要的或異常的細胞中起著必要的作用。它在生物體的進化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細胞凋亡不僅...

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【表觀遺傳】中樞性性早熟研究

中樞性性早熟（CPP）是兒科內(nèi)分泌的常見疾病，發(fā)病率較高，且逐年增加趨勢明顯。CPP可以導致患者或者家長出現(xiàn)社會、心理問題，而且還可能嚴重損害兒童的終身高。因此，CPP是兒科內(nèi)分泌醫(yī)生密切關注的疾病之一。CPP發(fā)病原因目前尚不明確，可能是由于某種因素促發(fā)了下丘腦促性腺激素釋放激素（GnRH）神經(jīng)元，使其提前活化，通過分泌大量的GnRH，進而激活下丘腦-垂體-性腺軸。5-羥色胺（5-HT）最初在血清中發(fā)現(xiàn)，又名血清素，是一種吲哚衍生物，它廣泛存在于哺乳動物中。5-HT由色氨酸代...

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細胞生物學實驗

細胞生物學實驗及其定制化解決方案常用的細胞生物學相關實驗，主要包含：細胞培養(yǎng)、細胞保種、原代細胞分離和培養(yǎng)、細胞增殖檢測（MTT法/CCK8法）、細胞凋亡、細胞周期、細胞遷移、細胞侵襲、流式細胞分選、慢病毒包裝及穩(wěn)轉株篩選、電生理檢測、定制化細胞模型等。原代細胞分離我司可提供細胞培養(yǎng)和原代細胞分離的服務。例如：原代schwann細胞、原代海馬神經(jīng)元細胞、原代成骨細胞、臍帶間充質干細胞、海綿體平滑肌細胞等。細胞培養(yǎng)與傳代細胞凍存/保種細胞復蘇細胞換液培養(yǎng)細胞傳代培養(yǎng)細胞共培養(yǎng)細...

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